082703基質膠是從小鼠腫瘤組織提取的基底膜成分(基底膜是動物體內上皮細胞基底面的一層基質膜),所形成的基質膠。主要成分為層粘連蛋白,Ⅳ型膠原蛋白,巢蛋白。同時,基質膠也包含多種生長因子,例如表皮生長因子EFG,血小板衍生生長因子PDGF,神經生長因子NGF等等。
操作方法:
一、類器官培養(操作所需時間為1小時)
1、將基質膠于4°C冰箱里的冰上過夜解凍。
2、將24孔板放置于培養箱預熱。
3、用預冷的槍頭將解凍的基質膠進行分裝。
4、準備病人或者動物組織(或者類器官)來源的,細胞總數為1X105的單細胞懸液。300g離心5min。
5、取50µL的OrganoGel基質膠與離心所得的細胞進行混勻。
6、取出預熱的24孔板,立即將基質膠與細胞的混合物滴加在孔板里,立即將24孔板放入培養箱。
7、約10min后,基質膠凝固后,向孔板里加入500µL類器官培養基,放于培養箱進行培養。
二、腫瘤類器官藥敏實驗(操作所需時間為2小時)
1、將擴增好足夠量的腫瘤類器官(實驗組)以及正常類器官(對照組)用4°C預冷的基礎培養基進行重懸,緩慢機械吹打,促進膠液化溶解,并保持類器官結構完整(可用于懸浮培養于有5%基質膠溶液的基質膠表面)(Guillenetal.2022)?;蛘咄ㄟ^TryplE酶消化獲得單細胞懸液。
2、離心收集類器官細胞,并進行細胞計數。
3、加入OrganoGel基質膠原液,與細胞進行混勻。
4、將細胞與膠的混合物,通過排槍加入37°C預熱過的96孔板,或者384孔板,立即將孔板放入培養箱。
5、大約10min后,OrganoGel基質膠將凝固,加入相應體積的類器官培養液進行培養。
6、類器官形成后(如果是機械吹打,類器官將在傳代24h后就會形成;如果是酶消化,類器官會在3-5天后形成),每個孔分別加入含有PI染料以及不同種類、不同濃度的待篩選的抗腫瘤藥物。
7、用高內涵顯微鏡上進行活細胞成像,測定腫瘤類器官對各種藥物的敏感性。